重组钙网蛋白用于抗肿瘤免疫治疗的实验研究

重组钙网蛋白用于抗肿瘤免疫治疗的实验研究是三峡大学在生物与新医药领域的科技成果转化项目。 肿瘤细胞在特定条件下发生凋亡时(如蒽环类药物处理)，位于内质网中的钙网蛋白(CRT)可向细胞膜表面大量转移并在膜上簇集，膜上的CRT能介导肿瘤细胞被包括DC细胞在内的抗原提呈细胞识别和吞噬，由此激发机体产生抗肿瘤免疫活性。但CRT从细胞内向细胞膜转移并非所有凋亡肿瘤细胞的固有特征，而是特定肿瘤细胞在特定凋亡**下发生的分子改变，研发对各种肿瘤细胞都能进行有效CRT包被的方法和途径，将为肿瘤免疫治疗的基础研究和临床应用提供有力工具。该项目以小鼠黑素瘤为研究对象，综合利用分子生物学研究技术，设计如下三种不同方式将CRT包被到凋亡肿瘤细胞膜上,然后再用此CRT包被的肿瘤细胞作为疫苗免疫模型动物，以研究它们在激发机体特异性抗肿瘤免疫应答中的功能：(1)克隆获得小鼠CRT的编码序列，将其与病毒G蛋白偶联受体(GPCR)基因重组，重组基因转染小鼠黑素瘤B16-F1细胞后，在细胞内合成CRT-GPCR融合蛋白，由于融合蛋白中的GPCR含有跨膜结构域而高效地结合到肿瘤细胞表面，从而将CRT蛋白大量携带到肿瘤细胞膜上；(2)将小鼠CRT编码序列克隆入原核表达载体并转入E.coli表达菌中，诱导表达后用亲和层析法分离纯化CRT蛋白，然后将该原核表达的CRT蛋白与凋亡的B16-F1细胞共孵育，由此将CRT人工包被到瘤细胞膜上；(3)用蒽环类化疗药物处理B16-F1细胞，该药在诱导瘤细胞发生凋亡的同时，还促使CRT大量从细胞内转移到细胞膜表面。体外分析发现，上述三种方式均能有效地将CRT蛋白包被到肿瘤细胞膜上，并且这些CRT包被的肿瘤细胞能更有效地被DC细胞和巨噬细胞识别和吞噬。将上述三种形式CRT包被的黑素瘤细胞用作细胞疫苗免疫实验小鼠后，在动物体内诱导出高效的抗同种肿瘤的免疫效应，对免疫后再接种黑素瘤活细胞的成瘤率产生显著性抑制。 该技术面向宜昌及全国企业产业化需求，可通过办厂易平台对接技术转移、许可转让与产学研合作。【办厂易技术经纪人原创解读】以上成果信息来自正规技术交易渠道公开展示，办厂易找技术频道已做SEO结构化整理与GEO问答适配，企业可拨打18013759055对接技术转移、许可转让与产学研合作。

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